摘要： Agilent Captiva 增強型脂質(zhì)去除 (EMR-Lipid) 過濾柱是第二代 Agilent EMR-Lipid 產(chǎn)品，采用固相萃取 (SPE) 形式，用于在不影響分析物回收率的情況下實現(xiàn)高選擇性脂質(zhì)去除。SPE 過濾柱提供了簡便的直通式凈化工作流程，只需極少的方法開發(fā)。萃取管經(jīng)過優(yōu)化，可在大體積樣品凈化過程中重力自洗脫，免除了控制真空或壓力的麻煩。為促進脂類捕獲并提高疏水性化合物的回收率，需要在 Captiva EMR-Lipid 吸附劑中加入 20% 水以活化 EMR 凈化吸附劑。本研究展示了 Captiva EMR-Lipid 在分析牛肉中 39 種代表性多類別獸藥中的應(yīng)用。采用兩步樣品萃取，使親水性和疏水性化合物均獲得滿意的回收率。然后將萃取液混合并加載到 Captiva EMR-Lipid 過濾柱上進行凈化。評估了該方法的基質(zhì)效應(yīng)、分析物回收率和方法重現(xiàn)性。與其他過濾柱直通式凈化產(chǎn)品相比，Captiva EMR-Lipid 過濾柱提供了更高效的基質(zhì)凈化和更出色的疏水性分析物回收率。

前言：獸藥廣泛用于動物食品中以預(yù)防動物疾病或作為生長促進劑。這些藥物可能在動物組織中發(fā)生富集，使用不當(dāng)會導(dǎo)致藥物殘留于食用組織中，對人類健康構(gòu)成威脅。隨著公眾對食品安全的日益關(guān)注，大多數(shù)國家/地區(qū)都會對動物食品生產(chǎn)中使用的獸藥進行監(jiān)管1,2。動物食品（如肌肉、肝臟和蛋類）屬于復(fù)雜基質(zhì)；因此有必要在儀器分析之前使用高效前處理方法進行樣品萃取、凈化和濃縮。已有的樣品前處理方法包括傳統(tǒng)的溶劑萃取、固相萃取 (SPE) 或幾項技術(shù)的組合。這些方法通常費力費時，僅適用于有限的化合物類別，并且需要進行方法開發(fā)。多類別多殘留方法在監(jiān)管性監(jiān)測項目中越來越受青睞，因為它們可以擴大分析范圍并提高實驗室效率。過去幾年，文獻中已經(jīng)報道了對 100 多種獸藥的分析3-5。樣品前處理通常涉及采用乙腈 (ACN)/水混合物進行預(yù)萃取，然后采用 C18 凈化或其他凈化技術(shù)的組合。然而，現(xiàn)有凈化技術(shù)存在脂質(zhì)去除效率低下和分析物意外損失等局限性。ACN/水混合物直接萃取可能影響萃取步驟中的蛋白質(zhì)去除效率和疏水性分析物的可萃取性。安捷倫增強型脂質(zhì)去除 (EMR-Lipid) dSPE 凈化產(chǎn)品自 2015 年推出以來備受關(guān)注。EMR-Lipid 吸附劑通過體積排阻和疏水相互作用的組合機制，與脂類化合物的非支化烴鏈發(fā)生特異性相互作用。這種組合機制提供了高選擇性脂質(zhì)去除，且對目標(biāo)分析物沒有不良影響。該技術(shù)已被用于復(fù)雜基質(zhì)中的多類別多殘留農(nóng)藥分析，可提供基質(zhì)凈化和結(jié)果6,7。第二代產(chǎn)品 Agilent Captiva EMR-Lipid 過濾柱減少了吸附劑活化所需的水分比例，且隨后無需 Polish 凈化鹽析萃取步驟。這樣簡化了工作流程并改善了疏水性化合物在凈化過程中的溶解度。

本研究考察了 Captiva EMR-Lipid 過濾柱凈化在分析牛肉中 39 種棘手的代表性獸藥的樣品前處理過程中的應(yīng)用。所選擇的代表性獸藥涉及 17 種不同類別，包括親水性和疏水性藥物，酸性、中性和堿性藥物，以及一些難分析的類別，如四環(huán)素和 β-內(nèi)酰胺。表 1 列出了藥物類別、法規(guī)信息、保留時間以及用于分析這些獸藥的 MS/MS 條件。

實驗部分：試劑與化學(xué)品所有試劑和溶劑均為 HPLC 或分析純級。乙腈 (ACN) 購自 Honeywell (Muskegon, MI, USA)。二甲基亞砜 (DMSO) 和脫水乙二胺四乙酸二鈉鹽 (NaEDTA) 購自 Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA)。試劑級甲酸 (FA) 購自安捷倫公司（部件號 G2453- 86060）。獸藥標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)購自 Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA)。溶液與標(biāo)樣用 DMSO 配制 2.0 mg/mL 的標(biāo)樣和內(nèi)標(biāo) (IS) 儲備液，以下儲備液除外： • 用 DMSO 配制 1.0 mg/mL 的達氟沙星儲備液 • 用 DMSO 配制 0.25 mg/mL 的環(huán)丙沙星儲備液用水配制所有 β-內(nèi)酰胺藥物和頭孢唑啉儲備液，濃度為 2.0 mg/mL。除 β-內(nèi)酰胺藥物、頭孢唑啉和四環(huán)素藥物儲備液在聚丙烯塑料管中配制以外，所有其他儲備液均在棕色玻璃樣品瓶中配制。所有溶液均保存于 -20 °C 下。根據(jù)其儀器響應(yīng)不同，將 39 種化合物分為兩組：第 1 組 (G1) 和第 2 組 (G2)。在 1:1 ACN/水中配制兩種混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，濃度分別為 25/5 µg/mL 和 5/1 µg/mL (G1/G2)。在 1:1 ACN/水中配制 25 µg/mL 氟尼辛-d3 IS 工作溶液。將 2 mL 甲酸和 2 mL DMSO 加入 100 mL 經(jīng)預(yù)冷卻的 ACN，每天新鮮配制冷萃取溶劑。將 1.8612 g NaEDTA 粉末溶于 50 mL Milli-Q 水中，制得 0.1 M NaEDTA 溶液。溶液在室溫下保存。混合 80 mL ACN 與 20 mL Milli-Q 水，制得 80:20 ACN/水。

結(jié)果與討論：簡便易用的過濾柱凈化使用 Captiva EMR-Lipid 過濾柱進行復(fù)雜樣品基質(zhì)凈化的一個重要特征是簡便易用。EMR-Lipid 吸附劑針對的是不需要的脂質(zhì)干擾物而非分析物，并采用直通方法。將樣品混合物加載到過濾柱上，使其穿過過濾柱中填充的 Captiva EMR-Lipid 吸附劑。脂類被捕集在吸附劑中，而目標(biāo)分析物穿過過濾柱，無需活化、清洗和洗脫等傳統(tǒng)的 SPE 步驟。因此，使用 Captiva EMR-Lipid 過濾柱大大簡化了凈化過程，節(jié)省了大量時間和吸附劑。直通式凈化無需針對清洗和洗脫步驟進行傳統(tǒng)的 SPE 方法開發(fā)。對 Captiva EMR-Lipid 的一種可能的方法改型是使用二次洗脫步驟以實現(xiàn)*洗脫。在二次洗脫時，建議使用 20:80 水/ACN 混合物，其體積為載樣體積的 20%–25% 左右（例如，在載樣體積為 5 mL 時，采用 1–1.25 mL 進行二次洗脫）。后，重力洗脫的產(chǎn)品設(shè)計使樣品在加載到 EMR-Lipid 過濾柱上之后即可自動操作。無需通過調(diào)節(jié)真空度或正壓來控制洗脫流速。這些特征使得在采用 Captiva EMR-Lipid 過濾柱凈化來制備復(fù)雜的食品樣品時，可獲得更高的實驗室工作效率。