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本期就溫度對(duì)高效液相色譜分析的影響展開(kāi)說(shuō)明，重點(diǎn)介紹柱溫和環(huán)境溫度對(duì)分析的影響。

一、柱溫對(duì)高效液相色譜分析的影響，通過(guò)范特霍夫方程來(lái)表達(dá)。

原則上，范特霍夫方程是用于計(jì)算在不同溫度下某反應(yīng)平衡常數(shù)的方程：

㏑K=－△H/RT+△S/R

   K：保留因子，描述色譜柱溫度相關(guān)系數(shù)

△H：流動(dòng)相和固定相之間分析物的焓變

△S：相應(yīng)的熵變        

   R：相位關(guān)系的常數(shù)        T：溫度

從公式中可以看出：lnk與時(shí)間1/T之間是線性關(guān)系，實(shí)際上因物質(zhì)特性、條件差異不一定出現(xiàn)良好相似性，在高效液相色譜檢測(cè)中柱溫的變化常常會(huì)造成某些指標(biāo)不良。

案例一：柱溫對(duì)含量、分離度及理論塔板數(shù)的影響。

某公司測(cè)試果糖及葡萄糖含量，分離度及理論塔板數(shù)結(jié)果異常。

1含量結(jié)果誤差大

< 數(shù)據(jù)對(duì)比結(jié)果 >

2分離度及理論塔板數(shù)下降

< A數(shù)據(jù) >

<B數(shù)據(jù) >

3原因分析

糖樣要求溫度：85℃，糖類(lèi)分析通常高溫會(huì)帶來(lái)高分離度，但超過(guò)90℃之后幾乎沒(méi)有變化，柱溫低于70℃對(duì)于許多糖類(lèi)來(lái)說(shuō)，不能提供足夠分離度。

經(jīng)排查發(fā)現(xiàn)，柱溫箱溫度偏差較大，與實(shí)際溫度相差20度，修正柱溫后，測(cè)試正常。

二、環(huán)境溫度對(duì)高效液相色譜分析的影響，歸類(lèi)來(lái)說(shuō)主要包含兩個(gè)方面：其一對(duì)檢測(cè)器影響；其二對(duì)流動(dòng)相影響。

案例二：室溫對(duì)基線噪音的影響；某公司測(cè)試過(guò)程中基線噪音異常變大。

設(shè)置波長(zhǎng)接近流動(dòng)相截止波長(zhǎng)時(shí)，室溫波動(dòng)超過(guò)1℃引發(fā)噪音變大。室溫穩(wěn)定后，基線正常。

案例三：某公司測(cè)試過(guò)程中保留時(shí)間異常。

室溫波動(dòng)超過(guò)3℃以上會(huì)引發(fā)壓力波動(dòng)，室溫穩(wěn)定后重新測(cè)試，保留時(shí)間正常。

檢查室溫變化發(fā)現(xiàn)，室溫波動(dòng)范圍2-4度左右，柱壓隨室溫變化而變化。

以上可知，環(huán)境溫度對(duì)高效液相色譜分析的影響，主要在以下兩個(gè)方面。

① 設(shè)置波長(zhǎng)接近流動(dòng)相截止波長(zhǎng)且室溫波動(dòng)大于1℃的情況下，造成噪音過(guò)大的情況，不影響保留時(shí)間。

② 流動(dòng)相不在截止波長(zhǎng)范圍且室溫波動(dòng)大于3℃以上的情況下，造成流動(dòng)相溫度的變化，進(jìn)而影響保留時(shí)間、基線漂移，但不影響基線噪音。

通過(guò)檢測(cè)器的原理，我們可以發(fā)現(xiàn)PDA、RF、RID等檢測(cè)器也易受環(huán)境溫度的影響。

四季更迭，氣溫波動(dòng)。液相色譜儀使用中應(yīng)關(guān)注溫度變化，從而消除溫度對(duì)分析的影響。