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在生物體內(nèi)包含有各種功能的蛋白質(zhì)，這些蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)處理后成為成熟蛋白質(zhì)并被釋放到細(xì)胞外，它們?cè)谙嗷プ饔孟驴赡軙?huì)導(dǎo)致疾病。為了了解這些疾病的病因、并在疾病的預(yù)防、診斷、治療及藥物開發(fā)研究等方面取得進(jìn)展，鑒定微量樣品氨基酸序列的蛋白質(zhì)鑒定分析工作就變得越來(lái)越重要。

蛋白質(zhì)N-端的序列組成對(duì)于蛋白質(zhì)整體的生物學(xué)功能有著巨大的影響力。對(duì)蛋白N-端測(cè)序中常用Edman降解法，其基本原理包括三個(gè)主要的化學(xué)步驟：①異硫氰酸苯脂與蛋白質(zhì)和多肽的N-端殘基的偶聯(lián)、②苯氨基硫甲酰酞（PTC-肽）環(huán)化裂解、③噻唑呤酮苯氨（ATZ）轉(zhuǎn)化為苯異硫尿氨基酸（PTH-氨基酸），每個(gè)循環(huán)從蛋白質(zhì)與多肽裂解出一個(gè)氨基酸殘基，同時(shí)暴露出新的游離的氨基酸進(jìn)行下一個(gè)Edman降解，最后通過(guò)轉(zhuǎn)移的PTH-氨基酸鑒定實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)序列的測(cè)定。此原理設(shè)計(jì)出的自動(dòng)分析儀進(jìn)行分析時(shí)，能夠可靠地測(cè)定肽鏈的30個(gè)左右氨基酸殘基序列，最多可以分析50-60個(gè)氨基酸殘基。

島津最新款蛋白測(cè)序儀PPSQ-51A/53A梯度系列以Edman降解法為基礎(chǔ)，將蛋白質(zhì)N-端順次切斷進(jìn)行序列分析，產(chǎn)品具有靈敏度高、等度洗脫、簡(jiǎn)便數(shù)據(jù)處理（差減色譜圖）、符合FDA 21 CFR part11規(guī)定、自動(dòng)生成報(bào)告、長(zhǎng)序列分析等特點(diǎn)，可以實(shí)現(xiàn)更靈敏、更可靠的蛋白質(zhì)N-端端氨基酸序列分析，能夠滿足用戶對(duì)微量樣品氨基酸序列的蛋白質(zhì)鑒定分析的各種需求。

【應(yīng)用案例】

PPSQ-51A/53A梯度系列在進(jìn)行微量蛋白分析中的應(yīng)用

★ Calmodulin的氨基酸序列分析

使用島津蛋白測(cè)序儀PPSQ-51A/53A梯度系列，在下述的分析條件（表1）下對(duì)500 fmol的PTH-氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行分析與矯正，從結(jié)果（圖1）可以得出該產(chǎn)品滿足進(jìn)行微量PTH-氨基酸混合溶液的檢測(cè)要求。

將Calmodulin（Merck cat#C4874）溶解于0.1%三氟乙酸水溶液中，調(diào)制濃度為1 pmol/µL的樣品溶液。在經(jīng)過(guò)聚凝胺處理的玻璃纖維盤中添加2µL的樣品溶液，進(jìn)行氨基酸序列分析。

各循環(huán)色譜圖（圖2）所示，其中第1個(gè)循環(huán)的色譜圖作為原始色譜圖，之后循環(huán)的色譜圖使用差減色譜圖表示。所有的30個(gè)循環(huán)內(nèi)，我們都能夠檢測(cè)到PTH-氨基酸并鑒定氨基酸序列，并且結(jié)果與理論序列一致。

圖2 Calmodulin氨基酸序列分析的色譜圖

【結(jié)論】

島津最新款蛋白測(cè)序儀PPSQ-51A/53A梯度系列在蛋白質(zhì)的N末端部氨基酸序列分析中，即使是微量樣品情況下，也可以完成氨基酸序列鑒定工作。其在無(wú)數(shù)據(jù)庫(kù)支持情況下，也可完成微量樣品的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析，是蛋白質(zhì)的氨基酸序列分析工作中的重要工具。

①高靈敏度分析：高靈敏度的流通池可實(shí)現(xiàn)PTH氨基酸的高靈敏度檢測(cè)，從而達(dá)到微量樣品的序列分析。

②分析穩(wěn)定性：該系統(tǒng)配備了高性能檢測(cè)器和溶劑輸送泵，具有很高的分析穩(wěn)定性，即使在微流量范圍內(nèi)，也能提供出色的泵送性能，進(jìn)而確保分析的高穩(wěn)定性。

③簡(jiǎn)單方便的數(shù)據(jù)分析：使用蛋白質(zhì)測(cè)序儀的專用軟件可方便地進(jìn)行序列分析所需色譜圖的后期處理、多個(gè)色譜圖的疊加以及氨基酸序列的自動(dòng)推測(cè)。

④符合FDA21 CFR Part 11規(guī)定：與LabSolutions DB/CS共同使用時(shí)符合FDA 21 CFR Part 11與PIC/S GMP指南中的要求

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