前言：茶葉（茶樹）是受歡迎的飲料之一，已經(jīng)有幾個世紀的歷史。綠茶尤其以它的抗癌性和抗老化性聞名。每年，都有數(shù)以百萬噸計的茶葉在中國和印度這樣的出口大國生長成熟并出口到各地。農(nóng)業(yè)化學品如殺蟲劑（如螨蟲，食葉甲蟲，毛蟲等等，用于控制害蟲）和殺螨劑及殺真菌劑在茶園中都在高度密集的使用，這已經(jīng)引起了消費者對接觸農(nóng)藥殘留造成的潛在健康風險的重視。因此，有必要提供農(nóng)殘的有效控制方法。干茶葉樣品基質(zhì)復雜，含有多種不同類別的化合物，表 1 列出了干茶葉中的主要成分。

實驗樣品制備稱量 2 g 經(jīng)干燥和均質(zhì)化處理的茶葉到 50 mL 的塑料離心管中，加入 10 ml 蒸餾水攪拌 30 s 后，離心 30 min。向管中加入10 ml 乙腈，劇烈攪拌 1 min，然后加入 4 g 硫酸鎂和 1g 氯化鈉（Agilent Bond Elut 部件號 5982-5550），以及磷酸三苯酯（TPP）作為內(nèi)標（ISTD）。進一步劇烈攪拌 1 min，將離心管以 10000 rpm 的速度離心 5 min。將 1 mL 乙腈上清液轉(zhuǎn)移至 15 mL 塑料離心管中，加入 1 mL 正己烷和 5 mL 20% 的氯化鈉水溶液。將離心管劇烈搖勻 1min 后以10000 rpm 的速度離心 1 min。將正己烷上清液轉(zhuǎn)移到 2 mL 自動進樣器的樣品瓶中，準備向氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)進樣。圖 1 總結(jié)了整個樣品萃取和凈化的步驟。通過使用這種簡單快速的樣品制備方法，一個工作人員可以在1 個小時內(nèi)可

樣品分析氣相色譜方法對氟樂靈在 6.219 min 進行保留時間鎖定，并使用后運行和柱后反吹。柱后反吹能夠確保在序列的下一個運行前快速而高效地（通過分流出口）去除上一次運行殘留在色譜柱上的任何高沸點基質(zhì)。反吹 [1] 可以：• 使分析物的保留時間和響應保持一致• 確保強大的色譜性能和一致的色譜峰形• 防止高沸點基質(zhì)污染質(zhì)譜離子源• 通過消除運行間隙的高溫烘烤延長了色譜柱壽命并縮短了循環(huán)時間色譜分析條件見表 2。安捷倫 7000B 三重四極桿氣相質(zhì)譜系統(tǒng)采用串聯(lián)質(zhì)譜電子電離源（EI）模式，使用多反應監(jiān)測模式（MRM）對每個化合物的2-8 個躍遷進行定性和定量。質(zhì)譜條件見表 3。表 2. 茶葉萃取液的氣相色譜分析條件色譜柱（1） 15 m × 0.25 mm，0.25 µm HP-5MSUI(19091S-431UI)色譜柱（2） 0.50 m × 0.15 mm，0.15 µm DB-5MSUI(cut from 165-6626)毛細管流裝置 帶微板流控模塊（PCM）的壓力控制三通自動進樣器 安捷倫 7693A 自動液體進樣器進樣 2 µL 冷柱頭不分流進樣，使用 CO2 冷卻多模式進樣口（MMI）不分流持續(xù)時間 1 min進樣口襯管 2 mm 內(nèi)徑帶凹槽去活襯管（5190-2296）進樣口程序升溫 50 °C（0.1 min），600 °C/min 升至 300 °C吹掃至分流閥 50 mL/min 保持 1.0 minRTL 化合物 氟樂靈，保留時間鎖定在 6.219 min載氣 氦氣進樣口壓力 17.460 psi 恒壓模式（運行期間）PCM 壓力 2.0 psi 恒壓模式（運行期間）柱箱升溫 50 °C（1.0 min），50 °C/min 升至 150 °C，6 °C/min 升至 200 °C，16 °C/min 升至 280 °C(4.07 min)后運行時間 2.0 min后運行溫度 280 °C后運行壓力 進樣口 1.0 psig，PCM 60.0 psig質(zhì)譜傳輸線溫度 280 °C

表 3. 茶葉中農(nóng)殘分析的質(zhì)譜條件離子源模式 El 源電子能量 –70 eV調(diào)諧 EI 自動調(diào)諧EM 增益 10MS1 分辨率 半峰寬 1.2 amuMS2 分辨率 半峰寬 1.2 amu躍遷 見參考文獻 [2]碰撞能量 見參考文獻 [2]駐留時間 2-28 ms，依據(jù)每個時間窗口的躍遷數(shù)，實現(xiàn) 5 個循環(huán)/秒碰撞池氣體流量 氮氣 1.5 mL/min，氦氣 2.25 mL/min質(zhì)譜溫度 離子源 280 °C，四級桿1 150 °C，四級桿2 150 °C圖 2 為氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)硬件配置的示意圖。

結(jié)果和討論色譜圖QuEChERS 初次萃取液和液液萃取后的最終萃取液中咖fei因和其他共萃取物的凈化效果見圖 3 所示，譜圖為全掃描采集到的質(zhì)譜譜圖。

圖 4 顯示了氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)分析物質(zhì)響應的穩(wěn)定性。茶葉萃取液的前 5 次進樣運行完畢后（當一個新的襯管剛開始使用時，需要穩(wěn)定分析物的響應，這稱為氣相色譜系統(tǒng)基質(zhì)老化），對 8 種濃度為 0.1 mg/kg 的農(nóng)藥加標茶葉萃取液連續(xù)進樣 150 次，得到的響應具有很高的重現(xiàn)性。這充分顯示了樣品運行期間反吹去除色譜柱上高沸點基質(zhì)的有效性。

儀器校準在正己烷溶劑中制備農(nóng)殘的茶葉基質(zhì)加標溶液，濃度依次為 0.2、0.5、1、2、5、10、20、30、50、100、200 和 300 ng/mL，在茶葉樣品中的濃度分別為 0.001、0.0025、0.005、0.01、0.025、0.05、0.1、0.15、0.25、0.5、1 和 1.5 mg/kg。每個基質(zhì)加標溶液中都含有 20 ng/mL 的 TPP 作為 ISTD（對應于茶葉樣品為0.1 mg/kg）。 5 為 0.1 mg/kg（20 ng/mL）基質(zhì)加標溶液的 MRM 譜圖。圖 6 分別為 0.05 mg/kg（10 ng/mL）基質(zhì)加標溶液中早期、中期和晚期流出的分析物（分別為二氯苯腈，三唑磷，醚菌酯）的SRM 譜圖。

方法性能此報告中實驗部分涉及的樣品制備方法和在應用的實驗部分細化的 氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析條件的優(yōu)化都經(jīng)過了 6 個綠茶和紅茶平行樣品的評估，每個加標樣品的農(nóng)藥濃度分別為 0.01、0.1和 1 mg/kg。圖 7 為分析兩種茶葉基質(zhì)得到的平均回收率和相對標準偏差（RSD）。數(shù)據(jù)表明，在兩種茶葉樣品農(nóng)藥濃度低至0.01 mg/kg 的水平上進行定量，回收率和重復性都取得了出色的結(jié)果。樣品分析將方法推廣到 37 個樣品中進行試點研究，進一步驗證了其性能和適用性。樣品包括綠茶和紅茶，其中還有一部分帶有香氣。測試結(jié)果如圖 8 所示。

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總體而言，81 % 的測試樣品呈陽性（0.01 mg/kg），含有至少一種農(nóng)藥。氯氰菊酯（68%）、硫丹（41%）、克螨特（38%）、聯(lián)苯菊酯（38%）、高效氯氟氰菊酯（24%）和噻嗪酮（24%）是最常見的農(nóng)藥。一些樣品包含接近 EU MRL 水平的農(nóng)藥，甚至還發(fā)現(xiàn)在一個樣品中有兩種農(nóng)藥（噻嗪酮和三唑磷）都超過了 EUMRL 水平。綠茶的陽性率比紅茶高，帶有香味的綠茶農(nóng)藥檢出率更高，這可能是因為精油和花瓣容易將更多的農(nóng)藥引入到茶葉中。這表明，為了減少消費者的膳食暴露，茶葉作為一種食品類商品的代表，需要開展更頻繁的農(nóng)殘監(jiān)測。

結(jié)論在干茶葉中對農(nóng)殘的測定極富挑戰(zhàn)性。干茶葉基質(zhì)很復雜，所以在進行多農(nóng)殘分析時無論是在樣品處理還是在色譜/質(zhì)譜分析上都具有一定的挑戰(zhàn)性。研究開發(fā)了一種新型萃取和快速凈化方法，用于分析茶葉樣品中的農(nóng)藥殘留。此項萃取和凈化技術以 QuEChERS 方法為基礎，先用乙腈萃取，之后輔予液液萃取。這種樣品處理方法顯著降低了終端萃取液中咖啡yin（茶葉中一種天然成分）和其他半揮發(fā)共萃取物的含量。終端萃取液中咖啡yin的降低能夠提高保留時間的重復性和那些與咖啡yin共流出或在其之后出峰的組分的檢出限。為了縮短色譜循環(huán)周期、消除高沸點組分殘留并減少離子源的污染，可使用微板流控技術對色譜柱進行后運行和柱后反吹的操作。對大多數(shù)被分析物，方法的性能指標能夠滿足 SANCO/12495/2011文件 [3] 的要求，回收率在可接受的 70%-120% 范圍內(nèi)，三個加標濃度的重復性都滿足 20% 的要求（0.01、0.1 和1 mg/kg）。對少數(shù)被分析物（如醚菌酯和六氯苯）來說，回收率較低，范圍在50% 到 70%。因為這些化合物的測定比較一致（20% RSD），可以通過已知的回收率系數(shù)對結(jié)果進行校正。在靈敏度方面，大多數(shù)被分析物可以在 0.001-0.005 mg/kg （相當于 0.2-1 ng/mL）的范圍內(nèi)定量，多數(shù)情況下，EU MRL 遠遠高于這個范圍，這就使得在 EU MRL 水平上對這些目標物進行準確的定性和定量成為可能。總而言之，優(yōu)化了的樣品制備步驟和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析條件賦予方法的性能和指標可確保在歐盟立法設定的 MRL 水