應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)介紹了一種采用 UHPLC-MS/MS 和多反應(yīng)監(jiān)測(cè) (MRM)模式的簡(jiǎn)單、快速的分析方法。該方法結(jié)合了本實(shí)驗(yàn)室已驗(yàn)證適合后續(xù) LC/MS 分析的快速酸萃取及過(guò)濾步驟，不僅適合于組胺的分析，同時(shí)也可應(yīng)用于酪胺和色胺的分析。質(zhì)譜的使用則可省掉衍生步驟。實(shí)際上，質(zhì)譜的使用也可增加結(jié)果的可靠性，因?yàn)殡鷥?nèi)標(biāo)可跟蹤分析的全過(guò)程。

實(shí)驗(yàn)部分試劑和標(biāo)準(zhǔn)品天然組胺和氘代組胺標(biāo)準(zhǔn)品從 Qmx 實(shí)驗(yàn)室 (Thaxted, UK) 獲得。天然標(biāo)準(zhǔn)品用乙腈配制成 1000 ppm 的工作溶液。然后用 0.1 MHCl 稀釋得到校準(zhǔn)曲線(xiàn)所需的濃度梯度。儀器本方法采用 Agilent 1290 Infinity LC 系統(tǒng)聯(lián)用配有安捷倫噴射流離子聚焦技術(shù)的 Agilent 6490 三重四極桿 LC/MS 系統(tǒng)。儀器條件在表 1 中列出。樣品前處理將 10 g 食品樣品和氘代內(nèi)標(biāo)物加入 50 mL 0.1 M HCl 中。渦旋混合并通過(guò) 0.2 µm 尼龍濾膜進(jìn)行過(guò)濾。校準(zhǔn)溶液的濃度范圍為 1 -50 mg/L。以往分析中常見(jiàn)的生物胺的濃度為 5 - 250 mg/kg，因而需將樣品稀釋 5 倍以滿(mǎn)足準(zhǔn)確定量要求。若樣品濃度更大，則需加大樣品的稀釋倍數(shù)，使得待分析液的最終濃度在校準(zhǔn)濃度范圍之內(nèi)。

結(jié)果與討論色譜分離采用 C3 色譜柱可使組胺在色譜柱上有較好的保留，同時(shí)又能最小化基質(zhì)效應(yīng)并能確保與干擾組分的分離。在較低濃度時(shí)，具有相同 MRM 離子對(duì)的其它化合物也出現(xiàn)在譜圖上。然而，內(nèi)標(biāo)可讓色譜圖上峰的歸屬毋庸置疑。

硬奶酪樣品樣品 A 的濃度較校準(zhǔn)濃度低，然而該方法的靈敏度*分析的要求，可基于校準(zhǔn)擬合得到半定量的結(jié)果。在該分析實(shí)例中，提取過(guò)程是將 10 g 樣品溶于 50 mL 0.1 M HCl 中提取，初步估計(jì)組胺的天然濃度為 1 mg/kg。樣品 B 則是添加了 300 ppm組胺的樣品，可確定方法的回收率。第二個(gè)實(shí)例中的提取則是將10 g 樣品溶于 100 mL 0.1 M HCl 中，該實(shí)驗(yàn)結(jié)果為 289 mg/kg（回收率大于 96%）。

定量及靈敏度從 0.1 M HCl 中組胺的校準(zhǔn)曲線(xiàn)可知，組胺在 1 - 50 mg/L 濃度范圍內(nèi)具有很好的線(xiàn)性，R2 值大于 0.999（圖 2）。實(shí)際上，該范圍的下限顯著低于歐盟法規(guī)要求的水平。因此，該方法非常有潛力對(duì)更低濃度水平的樣品進(jìn)行定量分析，如圖 1 所示，這對(duì)于食品基質(zhì)中生物胺的初期形成的考察是非常有用的。

其它工作回收率實(shí)驗(yàn)通過(guò)在魚(yú)組織中添加 100 mg/kg 標(biāo)準(zhǔn)品 (n=10) 進(jìn)行。組胺的回收率為 99 ± 4.6%。另外兩種生物胺的數(shù)據(jù)沒(méi)有在此列出，若有需要可向作者索要。

結(jié)論目前已開(kāi)發(fā)了一種簡(jiǎn)單、快速、便于操作的分析技術(shù)來(lái)進(jìn)行食品中組胺的檢測(cè)。它結(jié)合了快速經(jīng)濟(jì)的提取過(guò)程及高靈敏度的LC/MS/MS 分析檢測(cè)。該檢測(cè)基于配備安捷倫噴射流技術(shù)的6490 三重四極桿 LC/MS 系統(tǒng)。該方法的檢測(cè)限顯著低于歐盟法規(guī)限liang值。另外，該方法也很有可能被應(yīng)用于其它的安捷倫三重四極桿系統(tǒng)。也可以采用相同的離子對(duì)，盡管安捷倫對(duì)于其它類(lèi)型的儀器會(huì)推薦不同的離子源條件。該方法也可進(jìn)行其它生物胺的同時(shí)測(cè)定。在 Campden BRI 實(shí)驗(yàn)室，為應(yīng)對(duì)及支持食品檢測(cè)工作，已經(jīng)建立了部分生物胺的反應(yīng)離子對(duì)通道及相關(guān)條件。