摘要：本實(shí)驗(yàn)是使用Oasis® PRiME HLB處理動(dòng)物源性樣品基質(zhì)，建立了動(dòng)物肌肉樣 品中168種獸藥殘留同時(shí)檢測(cè)的方法。樣品經(jīng)酸化乙腈溶液提取，利用Oasis® PRiME HLB固相萃取小柱通過(guò)式凈化處理除去磷脂，UPLC-MS/MS檢測(cè)。在經(jīng) 過(guò)前處理方法與儀器條件優(yōu)化后，添加濃度為0.5~10 µg/kg的范圍內(nèi)時(shí)，磺胺、 喹諾酮、氯霉素、β-受體激動(dòng)劑、四環(huán)素、糖皮質(zhì)激素、大環(huán)內(nèi)酯、硝基咪唑、苯 并咪唑、內(nèi)酰胺、金剛烷胺、頭孢、性激素、鎮(zhèn)靜劑、阿維菌素、孔雀石綠、喹乙 醇、玉米赤霉醇、抗菌劑、抗球蟲劑、殺蟲劑、非甾體類抗炎藥、氨苯砜等23類， 共168種藥物回收率在20%-120%，精密度RSD<20%(n=5)。

前言：獸藥被廣泛的應(yīng)用于治療或預(yù)防動(dòng)物疾病。動(dòng)物在使用獸藥后，在細(xì) 胞、組織或器官內(nèi)蓄積或儲(chǔ)存藥物原型、有毒性的代謝物或雜質(zhì)，形成獸藥殘留 (Veterinary drug residue)。我國(guó)在畜牧養(yǎng)殖方面使用較多的獸藥主要有磺胺 類、喹諾酮類、β-受體激動(dòng)劑類、糖皮質(zhì)激素類、氯霉素類、頭孢類等化合物。 濫用獸藥易造成畜牧產(chǎn)品及環(huán)境的嚴(yán)重污染，并通過(guò)代謝途徑進(jìn)入畜禽產(chǎn)品中， 最終被人體攝入并蓄積，導(dǎo)致過(guò)敏反應(yīng)且使人體產(chǎn)生抗藥性等副作用。因此，監(jiān) 測(cè)多種獸藥在豬肉為代表的肉制品中的殘留對(duì)保證肉制品的安全具有積極意義。 目前，相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)報(bào)道的多獸藥殘留的同時(shí)檢測(cè)方法大多按照獸藥種類分 成若干種檢測(cè)方法，對(duì)于日益增長(zhǎng)的檢測(cè)量而言需要耗費(fèi)大量的人力物力，因此 亟需一個(gè)統(tǒng)一簡(jiǎn)便的多殘留檢測(cè)方案。 此創(chuàng)新的填料能夠有效的將樣品基質(zhì)中的蛋白、磷脂等干擾雜質(zhì)去除干凈。采 用Waters UPLC/Xevo® TQ-XS系統(tǒng)，結(jié)合QuanpediaTM數(shù)據(jù)庫(kù)，建立穩(wěn)定高效 的多獸藥殘留液相色譜串聯(lián)四極桿分析方法，獲得準(zhǔn)確分析結(jié)果。

儀器，試劑與材料 Waters ACQUITY UPLC® I-Class FTN，Waters Xevo TQ-XS三重四極桿質(zhì)譜，純水機(jī)，Milli-Q，臺(tái)式高速離心機(jī)，旋渦振蕩儀，移液 槍，乙腈，Oasis PRiME HLB固相萃取柱(200 mg，6 CC) 樣品前處理 稱取2.5 g均質(zhì)好的肉樣，加入80%乙腈水溶液(含0.2 %甲酸)10 mL，旋渦振蕩，4000 r/min高速離心5min，取上清液待凈化。 取Oasis PRiME HLB固相萃取柱，無(wú)需活化與平衡，將3 mL上清液 過(guò)固相萃取柱，保持一秒一滴的流速，收集全部流出液，然后再準(zhǔn) 確量取2 mL流出液，氮?dú)庀麓蹈桑? mL 初始流動(dòng)相定容，過(guò)GHP濾 膜，待上機(jī)測(cè)試。

流速： 0.45 mL/min 柱溫： 45 ?C 樣品溫度： 10 ?C 進(jìn)樣量： 2 µL 質(zhì)譜條件 離子源： ESI+/ ESI采集方式： MRM 毛細(xì)管電壓： 3.5 kV 離子源溫度： 150 ?C 脫溶劑氣溫度： 600 ?C 脫溶劑氣流速度： 1000 L/h 錐孔氣： 150 L/h 碰撞其流速： 0.15 mL/min

結(jié)果與討論 樣品處理的優(yōu)化 應(yīng)用中使用甲酸酸化的乙腈溶液提取目標(biāo)化合物，同時(shí)沉淀蛋白。 由于過(guò)高的甲酸添加量會(huì)對(duì)磺胺類等化合物回收率有影響，故本試 驗(yàn)中選取添加0.2%的甲酸于提取液中，且經(jīng)比較，0.2%甲酸乙腈 溶液能提高喹諾酮類等30多種化合物的回收率。 大量存在于動(dòng)物源性樣品中的磷脂，干擾部分化合物分析定量，影 響色譜柱壽命及儀器維護(hù)成本。利用Oasis PRiME HLB固相萃取小 柱凈化樣品，能有效去除磷脂等干擾雜質(zhì)。同時(shí)，采用通過(guò)式凈化 策略能極大提高樣品分析通量，并且經(jīng)過(guò)特殊設(shè)計(jì)的Oasis PRiME HLB流速更快且不容易被堵，也極大的提高了效率。儀器方法的優(yōu)化 本實(shí)驗(yàn)室UPLC-MS/MS方法的建立過(guò)程使用Waters Quanpedia 數(shù)據(jù)庫(kù)，庫(kù)中包含了1000多種化合物的LC-MS/MS方法，涵蓋了幾 乎所有食品檢測(cè)要求的獸藥種類。Waters Quanpedia數(shù)據(jù)庫(kù)操作 簡(jiǎn)便，是包含了從液相條件、采集方法到定量處理方法的完整方法 包，能大大節(jié)約方法開發(fā)時(shí)間，避免實(shí)驗(yàn)室間方法開發(fā)的差異。

方法回收率和精密度 采用在空白樣品中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液的方法進(jìn)行添加回收率測(cè)定。分別 添加0.5 µg/kg、1.0 µg/kg、2.0 µg/kg、10 µg/kg 4個(gè)濃度水平，按 所建立的方法進(jìn)行樣品處理及測(cè)定，每個(gè)濃度水平進(jìn)行3次重復(fù)測(cè) 定。方法采用空白基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，外標(biāo)法定量。各添加水平的回收 率分布如右圖。

……

結(jié)論 ■ 實(shí)驗(yàn)成功建立了同時(shí)測(cè)定23大類共168種獸藥殘留的分析方法。分析結(jié)果滿足動(dòng)物源性食品中獸藥殘留 檢測(cè)的相關(guān)要求。 ■ Oasis PRiME HLB固相萃取柱簡(jiǎn)單的通過(guò)式凈化處理能有效去除樣品中磷脂等干擾物，且處理過(guò)程簡(jiǎn)單 高效，適用于大批量日常分析檢測(cè)。 ■ Waters Quanpedia數(shù)據(jù)庫(kù)包含多獸藥殘留分析所需的LC-MS/MS方法，能節(jié)約方法開發(fā)成本，避免實(shí)驗(yàn) 室間方法差異。