本文由中國藥科大學天然藥物國家重點實驗室藥物代謝與藥代動力學重點實驗室所作，發(fā)表于Talanta 165 (2017) 128–135。

近年來，基質(zhì)輔助激光解吸/電離飛行時間質(zhì)譜成像（MALDI-TOF-MSI）技術(shù)受到了廣泛的關(guān)注，因為它可以對動植物組織切片中不同的分子進行定位，盡管在逐點絕對定量中仍存在一些障礙。奧曲肽是一種合成的生長抑素類似物，在臨床上廣泛應用于預防胃腸道出血。

本研究的目的是建立一種定量顯示奧曲肽在小鼠組織中空間分布的MALDI-TOF-MSI方法。在這個過程中，一個結(jié)構(gòu)相似的內(nèi)標物與基質(zhì)溶液一起被點到組織切片上，以盡量減少信號變化，并給出良好的定量結(jié)果。通過比較奧曲肽與不同基質(zhì)共結(jié)晶后MALDI-TOF-MSI產(chǎn)生的信噪比，選擇2,5-二羥基苯甲酸作為最合適的基質(zhì)。通過測定不同濃度的新鮮組織切片中奧曲肽的含量，驗證了MALDI-TOF-MSI在線性、靈敏度和精密度方面的可靠性。驗證的方法成功地應用于奧曲肽在小鼠組織中的分布研究。

結(jié)果表明，MALDI-TOF-MSI不僅能清晰地顯示奧曲肽的空間分布，而且可以計算關(guān)鍵的藥代動力學參數(shù)（Tmax和t1/2）。更重要的是，MALDI-TOF-MSI測定的奧曲肽的組織濃度-時間曲線與LC-MS/MS測定的結(jié)果一致。這些發(fā)現(xiàn)說明了MALDI-TOF-MSI在藥物開發(fā)過程中的藥代動力學分析潛力。

使用儀器：島津MALDI TOF、 LC–MS/MS

圖1 內(nèi)標對MALDI-TOF-MSI分析小鼠肝切片中奧曲肽線性的影響。(A) 小鼠肝臟切片上的蘭瑞肽(內(nèi)標)的質(zhì)譜圖，(B)加入奧曲肽標準溶液的肝臟切片光學圖像，(C)5個濃度水平的奧曲肽的代表性質(zhì)譜圖像([M+H]+離子;m/z 1019 Da)，(D) 用奧曲肽的平均信號強度繪制的奧曲肽校準曲線(n=5)，(E)經(jīng)內(nèi)標校正后的奧曲肽的代表性質(zhì)譜圖像，(F) 用奧曲肽/內(nèi)標的平均強度比繪制的奧曲肽校準曲線(n=5)

圖2 對口服20 mg/kg奧曲肽后0、10、30、60、90和120 min采集的小鼠組織進行成像MS分析。(A)胃切片的代表性光學和質(zhì)譜圖像，(B)腸切片的代表性光學和質(zhì)譜圖像，(C)肝切片的代表性光學和質(zhì)譜圖像

圖3 MALDI-TOF-MSI和LC-MS/MS測定奧曲肽的組織濃度-時間曲線。(A) MALDI-TOF-MSI法測定小鼠胃中奧曲肽的濃度-時間曲線;(B) LC-MS /MS法測定小鼠胃中奧曲肽的濃度-時間曲線;(C) LC-MS/MS法和MALDI-TOF-MSI法測定小鼠胃中奧曲肽的含量的相關(guān)性分析。

本研究開發(fā)了一種基于MALDI-TOF-MSI的小鼠組織切片奧曲肽定量分析方法。首次通過比較DHB、CHCA和SA提取的奧曲肽在一系列激光功率水平下的信噪比，系統(tǒng)研究了激光能量對MALDI基質(zhì)選擇的影響。結(jié)果表明，DHB、CHCA和SA的*功率水平應分別設(shè)置為50、70和60，DHB因其較高的靈敏度和較低的基質(zhì)效應最終被選為最合適的MALDI基質(zhì)。蘭瑞肽是一種與奧曲肽結(jié)構(gòu)相似的生長抑素類似物，被用作內(nèi)標，通過減小組織異質(zhì)性、基質(zhì)晶體異質(zhì)性和激光功率波動引起的離子信號變化，提高分析的線性、準確性和精密度。然后成功地應用所開發(fā)的MALDI-TOF-MSI方法，觀察口服20 mg/kg劑量后，奧曲肽在小鼠胃、腸、肝中的分布和消除過程。

結(jié)果表明，MALDI-TOF MSI不僅能清晰地顯示奧曲肽在小鼠組織中的空間分布，而且使關(guān)鍵藥物動力學參數(shù)(Tmax和t1/2)的計算成為可能。更重要的是，MALDI-TOF-MSI測定的奧曲肽的組織濃度-時間曲線與LC-MS/MS絕對定量的結(jié)果吻合較好。

文獻題目

《Optimization and evaluation of MALDI TOF mass spectrometric imaging for quantification of orally dosed octreotide in mouse tissues》

使用儀器

島津MALDI TOF、 LC–MS/MS

作者

Tai Rao, Boyu Shen，Zhangpei Zhu, Yuhao Shao, Dian Kang, Xinuo Li, Xiaoxi Yin, Haofeng Li,Lin Xie, Guangji Wang, Yan Liang

Key Lab of Drug Metabolism & hamacokinets,State Key Laboratory of Natural Medicines,China Pharmaceutical University, Tongjiaxiang 24, Nanjing 210009 PR China