Bevacizumab是重組人源化人血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）單克隆抗體，作為美國第一個獲得批準(zhǔn)上市的抑制腫瘤血管生成的藥，可用于轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌以及非鱗狀非小細(xì)胞肺癌治療等。在中國，超過10家貝伐珠單抗生物類似藥在研發(fā)上市過程中，面對生物類似藥分析，充滿技術(shù)挑戰(zhàn)，貝伐單抗生物類似藥表征是質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)之一，分析過程中，抗體肽圖分析方法尤為關(guān)鍵，今天我們就聊一聊貝伐單抗生物類似藥肽圖分析技術(shù)方法。

肽圖分析（peptide mapping）是研究抗體藥物結(jié)構(gòu)組成的重要技術(shù)之一，抗體通過酶切處理后，利用色譜結(jié)合島津高分辨Q-TOF質(zhì)譜LCMS-9030分析，不僅可以對蛋白質(zhì)氨基酸序列進(jìn)行分析，同時(shí)可以對于相應(yīng)肽段的翻譯化修飾（PTM）進(jìn)行分析。通過島津反相HPLC方法分離不同性質(zhì)的肽段，后續(xù)肽段通過高分辨質(zhì)譜進(jìn)行一級和二級掃描，通過監(jiān)測的母離子和子離子匹配相應(yīng)的肽段氨基酸序列以及存在的修飾。肽圖分析是抗體蛋白藥物質(zhì)量控制的重要手段，島津高分辨質(zhì)譜可以完成相關(guān)所有的分析檢測項(xiàng)目。

分析儀器及色譜柱方案

01分析儀器

LCMS-9030四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀使高速度、高靈敏度的四極桿質(zhì)譜與TOF技術(shù)的緊密結(jié)合。融合島津先進(jìn)工程技藝的DNA，打造出速度與出色性能兼?zhèn)涞娜乱淮叻直尜|(zhì)譜儀，以優(yōu)異表現(xiàn)輕松勝任定性和定量分析挑戰(zhàn)。

LCMS-9030

02液相色譜柱

● 反相肽段分析用色譜柱

● 壽命長，耐壓高，出峰穩(wěn)定

Shim-pack GISS-HP,3um，150*3.0 mm

應(yīng)用實(shí)例

以bevacizumab 生物類似藥為例，進(jìn)行peptide mapping分析，將抗體蛋白通過胰酶酶切后，通過反相色譜質(zhì)譜分離后進(jìn)入高分辨Q-TOF質(zhì)譜進(jìn)行一級全掃描和二級掃描，高分辨數(shù)據(jù)提取分析匹配相應(yīng)的肽段序列，完整流程如下圖所示。

圖. 利用島津LCMS-9030抗體測序基本流程以及舉例

島津分析bevacizumab 生物類似藥序列分析，通過Shim-pack GISS-HP色譜柱（3um，150*3.0 mm），可以高效分離酶切后的輕重鏈肽段，后用LC-MS 9030 進(jìn)行一級和二級掃描，參數(shù)色譜質(zhì)譜參數(shù)如下表所示。

圖. 利用島津LCMS-9030抗體測序詳細(xì)參數(shù)

通過軟件分析高分辨數(shù)據(jù)，進(jìn)而匹配生物類似藥的重鏈和輕鏈序列，完成整個抗體的肽圖分析。因篇幅有限，以重鏈肽段序列部分?jǐn)?shù)據(jù)進(jìn)行展示，匹配覆蓋率100%，可以說明島津LCMS-9030 Q-TOF質(zhì)譜在抗體肽段分析方面具有強(qiáng)大的實(shí)力。部分序列分析結(jié)果見下圖所示。

圖.bevacizumab 生物類似藥重鏈測序結(jié)果展示（部分展示）

結(jié)合前述案例，島津建立高分辨質(zhì)譜LCMS-9030針對抗體藥物進(jìn)行肽圖分析完整策略，此外對于分子量分析、翻譯化修飾、二硫鍵分析、糖基化分析，LCMS-9030可以完成所有相關(guān)抗體藥物關(guān)鍵質(zhì)量屬性檢測，為用戶節(jié)能增效，創(chuàng)造大價(jià)值。