前言：本研究開發(fā)出一種使用微型 Agilent Ultivo 三重四極桿 LC/MS 定量分析血清中游離睪酮的穩(wěn)定、靈敏且相對快速的分析方法。Ultivo 設(shè)計(jì)用于解決常規(guī)分析實(shí)驗(yàn)室所面臨的許多挑戰(zhàn)。本研究的目的在于評估這種新型三重四極桿質(zhì)譜儀 (MS) 如何用于分析受研究關(guān)注的典型內(nèi)源性分析物1 。Ultivo 采用的創(chuàng)新技術(shù)使安捷倫能夠減小儀器體積，同時(shí)達(dá)到與類似大型質(zhì)譜系統(tǒng)相當(dāng)?shù)姆治鲂阅芩健acShield 真空盾、 Cyclone Ion Guide 氣旋離子導(dǎo)桿、十二極桿 Vortex Collision Cell 渦旋碰撞室和小型雙曲面四極桿等儀器創(chuàng)新旨在大程度提高微型儀器的定量分析性能，并提高儀器可靠性和穩(wěn)定性。 Ultivo 減少了用戶對系統(tǒng)維護(hù)的干預(yù)，使非專業(yè)質(zhì)譜用戶能夠從容應(yīng)對系統(tǒng)運(yùn)行和維護(hù)。Agilent MassHunter 軟件簡化了數(shù)據(jù)采集、方法設(shè)置、數(shù)據(jù)分析和報(bào)告，獲得了從采集到報(bào)告的短時(shí)間，提高了實(shí)驗(yàn)室分析效率。本研究概述了使用 Ultivo 三重四極桿 LC/MS 得到的人血清中游離睪酮的典型確認(rèn)性能，概述了定量下限、色譜精度、校準(zhǔn)線性、范圍和準(zhǔn)確度。

化學(xué)品與試劑用于基質(zhì)匹配校準(zhǔn)品的人血清購自 Golden West Biologicals (Temecula, CA)。標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo)購自 Cerilliant Corporation (Round Rock, TX)。樣品前處理和液相色譜溶劑購自 SigmaAldrich (St. Louis, MO) 和 Honeywell Riedel-de Haën (Seelze, Germany)。

樣品前處理通過在陰性人血清中加標(biāo)睪酮獲得高濃度樣品，然后通過用潔凈血清連續(xù)稀釋制得低濃度樣品。使用 500 µL 乙腈通過蛋白質(zhì)沉淀對 250 µL 各種樣品進(jìn)行提取。將樣品渦旋混合 1 分鐘，然后以 10000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 4 分鐘。在引入液相色譜系統(tǒng)中之前，用 500 µL 水對 500 µL 上清液進(jìn)行稀釋。制備濃度范圍為 0.001–100 ng/mL 的 11 點(diǎn)校準(zhǔn)曲線標(biāo)樣，重復(fù)三次。將足量的內(nèi)標(biāo)儲備液直接加入每種基質(zhì)標(biāo)樣和校準(zhǔn)品中，使進(jìn)樣分析的所有類型樣品均獲得 25 ng/mL 的一致濃度。數(shù)據(jù)分析采集數(shù)據(jù)并用 Agilent MassHunter 軟件包 C.01.00 版對 Ultivo 采集的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。利用 Agilent MassHunter Acquisition Optimizer 軟件獲得 MS/MS 離子對，以確定母離子和子離子、碎裂電壓和碰撞能量。進(jìn)樣各種化合物或內(nèi)標(biāo)的純?nèi)芤海舛葹?1000 ng/mL，在流動注射模式下進(jìn)樣量為 2 µL）后，即完成分析步驟。

結(jié)果與討論：線性睪酮分析物的校準(zhǔn)濃度范圍為 1 pg/mL 至 100 ng/mL。利用 1/x 的加權(quán)因子得到睪酮化合物在整個(gè)濃度范圍內(nèi)表現(xiàn)出線性效應(yīng)，在 n = 3 的條件下，R2 值高于 0.999。由三批樣品得到的精度數(shù)據(jù)表明，在所有校準(zhǔn)濃度下，%RSD 變化小于 5%。

結(jié)論：本研究項(xiàng)目表明，Agilent Ultivo 三重四極桿 LC/MS 能夠在 6 分鐘的分析周期內(nèi)使人血清中濃度在 1 pg/mL 至 100 ng/mL 范圍內(nèi)的游離睪酮分析得到優(yōu)異的線性、精度和分析靈敏度。未來的工作中，需要評估不同供應(yīng)商來源的血清和血液基質(zhì)對這種分析方法的潛在干擾，以及通過更多樣品前處理技術(shù)配制 LC/MS 分析樣品的影響。