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在UPLC-MS對(duì)肉中獸藥多殘留分析之前采用HLB小柱進(jìn)行有效凈化

2020年10月19日 20:01 來(lái)源:上海斯邁歐分析儀器有限公司

目的:展示在UPLC®-MS分析之前采用Oasis® PRiME HLB小柱凈化肉類(lèi)提取物的效率。

背景:沃特世(Waters®)為肉中獸藥多殘留沃特世液質(zhì)聯(lián)用儀LC-MS/ MS篩查開(kāi)發(fā)了優(yōu)化的樣品前處理和分析方案。典型肉類(lèi)樣品的主要成分是水(高達(dá) 70%)、蛋白質(zhì)(15-25%)、脂肪(5-25%)和磷脂(1-3%)。在提取過(guò)程中,蛋白質(zhì)可以通過(guò)沉淀和離心去除。然而,大量脂肪和磷脂會(huì)隨著目標(biāo)物化合物一起提取出來(lái)。這些共提取物質(zhì)的存在可能會(huì)干擾LC-MS分析,污染 UPLC系統(tǒng)的分析柱和其它組件,并且還會(huì)污染質(zhì)譜儀。在過(guò)去,分析人員采用繁瑣的正己烷脫脂步驟或使用反相吸附劑(如硅膠C18) 從肉類(lèi)提取物中去除脂肪。雖然這些技術(shù)可以有效去除脂肪,但均不能去除磷脂。

 

脂肪和磷脂對(duì)儀器和色譜柱而言是非常棘手的潛在污染物。Oasis PRiME HLB小柱提供了一種在LC-MS分析前對(duì)肉類(lèi)提取物進(jìn)行快速凈化以去除這些物質(zhì)的方法。

解決方案:使用Oasis PRiME HLB小柱通過(guò)式凈化可以從肉類(lèi)提取物中高效地去除脂肪和磷脂。同樣重要的是,Oasis PRiME HLB小柱凈化不會(huì)影響獸藥的回收率。該方法的回收率與使用正己烷脫脂法或硅膠C18凈化法得到的回收率相當(dāng),但使用Oasis PRiME HLB 小柱時(shí)的凈化效率更高。

 

實(shí)驗(yàn)初步提取。從獸藥中選擇具有代表性的化合物,稱(chēng)取5 g豬肉樣品(含15%脂肪)并勻漿,加入10 mL含0.2%甲酸的乙腈/水(80:20) 進(jìn)行提取。將樣品渦旋混合30秒、振搖30分鐘,然后在12000 rpm下離心5分鐘。 Oasis PRiME HLB小柱凈化。 將Oasis PRiME HLB小柱(3 cc, 60 mg)安裝在預(yù)先清潔過(guò)的真空導(dǎo)管上。無(wú)需執(zhí)行小柱活化步驟。取約0.5 mL的上清液,使其通過(guò)Oasis PRiME HLB小柱并收集濾液。進(jìn)行UPLC-MS/MS分析之前,用10 mM甲酸銨緩沖溶液 (pH 4.5)將收集到的樣品稀釋3倍。

 

結(jié)果:所有被測(cè)化合物在通過(guò)式凈化步驟中均無(wú)損失或損失極少。除保泰松(32%)外,其余被測(cè)化合物的回收率(主要通過(guò)測(cè)量初始液相提取步驟的效率所得)的平均值超過(guò)了80%。上述回收率與使用硅膠C18凈化方法的結(jié)果相當(dāng),但硅膠 C18不能去除磷脂。UPLC-MS/MS條件和色譜圖如圖1所示。圖2所示的色譜圖展示了Oasis PRiME HLB小柱去除磷脂的效率;它比硅膠C18凈化方法多去除了90%以上的磷脂。通過(guò)重量分析,我們還測(cè)得Oasis PRiME HLB小柱去除了豬肉提取物中90%以上的共提取脂肪。

 

結(jié)論 ■ Oasis PRiME HLB小柱在使用前不需要活化或平衡;其簡(jiǎn)單的一步式SPE凈化非常有效。 ■ Oasis PRiME HLB小柱去除了豬肉樣品的乙腈提取物中 90%以上的脂肪和磷脂。 ■ 采用Oasis PRiME HLB小柱通過(guò)式的凈化不會(huì)影響待測(cè)化合物的回收率,還能有效去除提取物中的脂肪和磷脂。

關(guān)鍵詞: 液質(zhì)聯(lián)用儀

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