1. 關(guān)鍵詞 賽默飛TSQ 8000 Evo；煙草基質(zhì)；農(nóng)藥殘留；快速篩查；方法包

2. 前言 2014 年 1 月 15 日中國(guó)煙草總公司頒布了煙草及煙草制品中 多種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) YQ/T 47.1—2014，其中第 一部分為串接氣質(zhì)檢測(cè)農(nóng)藥殘留的方法。該標(biāo)準(zhǔn)于 2014 年 2 月 10 正式實(shí)施。賽默飛世爾科技針對(duì)這一行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，開(kāi)發(fā)了 煙草中檢測(cè)多農(nóng)殘的方法。 本實(shí)驗(yàn)用 TSQ 8000 Evo 結(jié)合賽默飛世爾科技農(nóng)殘分析色譜柱 （TR-pesticide II 30 m*0.25 mm*0.25 µm）分析煙草中的 122 種農(nóng)藥殘留，得到了非常出色的結(jié)果。各種農(nóng)藥的低檢測(cè) 限在 0.004ppb-0.75ppb 之間，在 5 ppb–200 ppb 的范圍有 良好的線(xiàn)性，且用 10 ppb 樣品連續(xù) 5 針進(jìn)樣，得到 RSD 在 1.01%–9.69% 之間，表明此方法具有良好的重現(xiàn)性。

3. 實(shí)驗(yàn)部分 3.1 儀器和色譜柱 TSQ 8000 Evo 三重四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（Thermo ScientificTM 美 國(guó)），TR-pesticide II 農(nóng) 殘 分 析 柱（30 m*0.25 mm*0.25 µm 帶 5m 預(yù)柱）

3.2 儀器方法 GC 方法： 傳輸線(xiàn)溫度：300ºC。 PTV 進(jìn)樣口：起始溫度為 70ºC，進(jìn)樣時(shí)間 0.05 min；然后 以 4.5ºC/min 升至 280ºC，保持 1 min，將所有化合物通過(guò) 程序升溫的進(jìn)樣方式轉(zhuǎn)移至色譜柱；隨后以 14.5ºC/min 升至 320ºC，保持 5 min，設(shè)置進(jìn)樣口的清潔模式。不分流進(jìn)樣，不分流時(shí)間 1.5 min。 載氣：恒流，1.2 mL/min； 柱溫箱：40ºC 起始保持 1.5 min，以 25ºC/min 升至 90°， 保持 1.5 min；再以 25ºC/min 的速率升至 180ºC；隨后以 5ºC/min 的速率升至 280ºC；后以 10ºC/min 的速率升至 300ºC，保持 5 min。整個(gè)升溫程序 35 min。 進(jìn)樣量：2 µ

質(zhì)譜方法： 離子源溫度：300 ºC，燈絲電流為 25 µA，采用 T-SRM 方法， 無(wú)需分時(shí)間段。部分方法如圖 1 所示（總共 402 對(duì) SRM 離子 對(duì)）：

3.3 前處理方法 提取 稱(chēng)取 2 g 樣品于 50 mL 具蓋離心管中，至 0.01 g，加 入 10 mL 水（4.1），手持離心管振蕩直至樣品與水充分混合 后，靜置 10 min。分別移取 10 mL 乙腈（4.2）和 0.1 mL 混 合內(nèi)標(biāo)工作溶液（4.11.4）于該離心管中，并置于漩渦混合 振蕩儀（5.2）上以 2000 r/min 速率振蕩 2 min。將離心管在 （-18℃ ~-20℃）條件下冷凍保存 10 min 后，取出。向離心 管中分別加入 5 mL 甲苯（4.3）、4 g 無(wú)水硫酸鎂（4.4）、1 g 氯化鈉（4.5）、1 g 檸檬酸鈉（4.6）、0.5 g 檸檬酸氫二鈉（4.7）， 立即手持離心管劇烈振蕩以防結(jié)塊，再置于漩渦混合振蕩儀 （5.2）上以 2000 r/min 速度振蕩 2 min，然后以 4000 r/min 離心 5 min。收集上層清液備用。

凈化 移取 1.5 mL 樣品提取液上層清液（7.1）于 2 mL 離心管中， 加入 150 mg 無(wú)水硫酸鎂（4.4）和 50 mg N- 丙基乙二胺鍵合 固相吸附劑（4.8），于漩渦混合振蕩儀（5.2）上以 2000 r/ min 速率振蕩 2 min，以 4000 r/min 離心 5 min，收集上層清液， 待檢測(cè)分析。

4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 4.1 Auto SRM 優(yōu)化部分化合物的離子對(duì)信息 TSQ 8000 Evo 的整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程可以參考圖 2。TSQ 8000 Evo 自帶的 TraceFinder 軟件有一個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)，該數(shù)據(jù)庫(kù)包含常規(guī)三 重四極桿串接氣質(zhì)上分析的 1000 多種化合物離子對(duì)信息，如 農(nóng)藥，環(huán)境污染物等化合物。所以，當(dāng)我們需要完成手頭上化 合物的方法建立時(shí)，可以首先參考數(shù)據(jù)庫(kù)中的離子對(duì)信息。數(shù) 據(jù)庫(kù)中查不到的化合物離子對(duì)信息，可以使用 TSQ 8000 Evo 特有的 AutoSRM 軟件來(lái)自動(dòng)完成。

AutoSRM 顧名思義就是可以自動(dòng)優(yōu)化化合物 SRM 離子對(duì)的軟 件，該軟件通過(guò)選擇母離子，選擇子離子，自動(dòng)優(yōu)化碰撞能 量這三個(gè)步驟可以完成方法優(yōu)化，極大得簡(jiǎn)化了常規(guī)串接氣質(zhì) 建立化合物檢測(cè)方法的步驟，節(jié)省了時(shí)間。賽默飛世爾科技全 新一代三重四極桿氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀 TSQ 8000 Evo *的 AutoSRM 功能，可以自動(dòng)優(yōu)化離子對(duì)信息及碰撞能量，并且當(dāng) 一次優(yōu)化的化合物數(shù)目較多時(shí)，可以智能得調(diào)整進(jìn)樣的次數(shù)以 期在少的時(shí)間內(nèi)得到優(yōu)化的方法，使得整個(gè)方法建立部分 更加簡(jiǎn)單方便。

4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) 分別配置 5 ppb、10 ppb、20 ppb、50 ppb、100 ppb、200 ppb 的混標(biāo)溶液，采用內(nèi)標(biāo)法定量，內(nèi)標(biāo)為莠去津或者三苯基磷酸酯（按 照保留時(shí)間來(lái)確定以哪種物質(zhì)為內(nèi)標(biāo)，本實(shí)驗(yàn)保留時(shí)間在 20 min 之前的化合物都以莠去津?yàn)閮?nèi)標(biāo)，20 min 之后以三苯基磷酸酯為 內(nèi)標(biāo)）。下表列出所有 122 種化合物的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程以及線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)，可以看出，應(yīng)用 TSQ 8000 Evo 快速掃描檢測(cè)這 122 種 化合物，可以得到良好的線(xiàn)性方式，有利于定量的準(zhǔn)確性。

4.3 重現(xiàn)性及低檢出限 用10ppb的樣品重復(fù)進(jìn)樣5針，檢測(cè)方法的重現(xiàn)性。所得的重現(xiàn)性結(jié)果如下圖所示，所有的化合物的重現(xiàn)性在1.01%-9.69%之間（如 表 2 所示）。 分別配置 100ppt、200ppt、500ppt、1ppb 以及 2ppb 的樣品，按照 S/N 為 3 和 S/N 為 10 來(lái)估算化合物的低檢出限及低定量限。

4.4 煙草中農(nóng)殘檢測(cè)的方法包 方法包是賽默飛世爾科技色譜質(zhì)譜部應(yīng)用部門(mén)針對(duì)客戶(hù)需求提 出的簡(jiǎn)易儀器使用流程，方法包內(nèi)所涉及的化合物均為常見(jiàn)的 能在 GC/MS 上檢測(cè)的化合物，如農(nóng)藥殘留、多環(huán)芳烴、多氯 聯(lián)苯、多溴聯(lián)苯和多溴聯(lián)苯醚、鄰苯二甲酸酯等。方法包的作 用就是能使客戶(hù)更快更簡(jiǎn)便得使用儀器，盡快上手。 方法包包括進(jìn)樣方法、數(shù)據(jù)處理方法（TraceFinder 方法文件 夾）、相關(guān)應(yīng)用文章、相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、色譜柱信息、前處理方法， 數(shù)據(jù)文件等，客戶(hù)可以直接調(diào)用進(jìn)樣方法和數(shù)據(jù)處理方法完成 化合物的定性定量分析。

由于 TSQ 8000 Evo 采用 T-SRM 進(jìn)樣方法而不是分時(shí)間段的 掃描方法，原來(lái)的進(jìn)樣的方法可以直接調(diào)用，即使保留時(shí)間會(huì) 有微小的偏差，也不會(huì)影響終的結(jié)果。另外，TraceFinder 軟件自帶的數(shù)據(jù)庫(kù)可以直接編輯數(shù)據(jù)處理方法，數(shù)據(jù)庫(kù)里包 括化合物的名稱(chēng)、離子對(duì)、碰撞能量、定量離子、定性離 子、CAS 號(hào)等信息。同時(shí)，TraceFinder 軟件可以根據(jù)數(shù)據(jù)處 理方法自動(dòng)關(guān)聯(lián)生成 TSQ 8000 Evo 的方法文件。這樣應(yīng)用 TraceFinder 就可以直接生成數(shù)據(jù)處理方法和部分進(jìn)樣方法。 整個(gè)過(guò)程都是自動(dòng)化的，幾乎不需要操作者手動(dòng)輸入任何操作 信息。

想要快速建立方法時(shí)，直接拷貝方法包中的文件夾到 C:\ TraceFinderData\32\Methods 中，方法就可以在 TraceFinder 軟件中打開(kāi)，這個(gè)方法包括數(shù)據(jù)處理方法和進(jìn)樣方法。

5. 結(jié)論： 應(yīng)用 Thermo ScientificTM 三重四極桿串接氣質(zhì)聯(lián)用儀 TSQ 8000 Evo，可以快速分析煙草中的農(nóng)藥殘留。方法學(xué)驗(yàn)證表明，該 方法的線(xiàn)性、檢出限、RSD 值均滿(mǎn)足 YQ/T 47.1—2014 煙草及 煙草制品多種農(nóng)藥殘留量的測(cè)定以及 YQ 50—2014 煙葉農(nóng)藥 大殘留*的要求。應(yīng)用 Thermo Fisher 方法包，可以快速建 立進(jìn)樣方法和數(shù)據(jù)處理方法，拿來(lái)即用，無(wú)需從數(shù)據(jù)庫(kù)中整合 信息建立方法，而是直接用現(xiàn)成的方法，節(jié)省大量時(shí)間，提高 分析效率。一級(jí)和二級(jí)高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)，保證了定性和定量結(jié) 果的可靠性；媲美三重四極桿的靈敏度和寬線(xiàn)性范圍可輕 松定量藥物中的痕量雜質(zhì)。與三重四極桿質(zhì)譜相比，Q Exactive Focus 采用一級(jí)質(zhì)譜定量不需要優(yōu)化母離子，子離子參數(shù)，僅利 用目標(biāo)化合物精密分子質(zhì)量即可實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定量，更為方便快速。 采用二級(jí)高分辨質(zhì)譜定量可以記錄子離子全掃描信息，通過(guò)在 數(shù)據(jù)后處理中靈活的挑選更具有專(zhuān)屬性的子離子進(jìn)行定量，有 效的排除基質(zhì)干擾，選擇性更好，靈敏度更高。