目的：采用液相色譜與三重四極桿質譜聯(lián)用技術，為尿液中 EtG 和 EtS 的法醫(yī)毒物學分析開發(fā)耐用靈敏的 LC-MS/MS 分析工作流程。

前言：*，乙基葡萄糖醛酸苷（EtG）和硫酸二乙酯（EtS）可作為監(jiān)測乙醇消耗量的生物標志物。雖然它們是乙醇的次生代謝產物，但由于半衰期較長，因此可在法醫(yī)研究中被用于檢測過去是否服用過酒精。

實驗：
樣品制備：將等體積（50 µL）尿液與內標化合物（5000 ng/mL EtG-d5 和 500 ng/mL
EtS-d5）混合，然后用 900 µL 的水稀釋 20 倍。將 5 µL 樣品進樣至 LC-
MS/MS 系統(tǒng)。

液相色譜方法
采用 Thermo Scientific TM VanquishTM Flex HPLC 系統(tǒng)和Phenomenex ® Synergi TM Hydro 反相色譜柱（100×3 mm，2.5 µm 粒徑）進行色譜分離。流動相 A 和 B 分別為含0.1％ 甲酸的水和含 0.1％ 甲酸的甲醇溶液，溶劑分別為Fisher Chemical TM Optima TM 級水和甲醇?？傔\行時間為6 分鐘。

質譜方法
采用配置加熱電噴霧電離探針的 TSQ Quantis 三重四極桿質譜進行分析。表 1 顯示了質譜儀的離子源參數(shù)

分析 EtG、EtS 及其氘化內標化合物時同時監(jiān)測了兩種選擇反應監(jiān)測（SRM）離子對，用于離子比率確認（IRC）。在分時選擇反應監(jiān)測（t-SRM）模式下進行掃描，循環(huán)時間為 0.4 秒。表 2 顯示了本次分析中使用的 SRM 離子對信息。

數(shù)據分析：采用 Thermo Scientific TM TraceFinder  TM 軟件采集并處理數(shù)據。

評價
通過分析校正曲線，然后同一樣品重復進樣六次作為質控樣（QC），測定分析精密度和準確度。通過 17 個不同批次人尿液中的內標信號評價基質效應。

結果與討論
將 EtG 和 EtS 的定量限（LOQ）定義為根據線性校正曲線反算得到的校正物濃度位于理論值 20％ 范圍內、離子比率在目標物 20% 范圍內且重復進樣的 %RSD 低于20% 時的低濃度。正常尿液中 EtG 和 EtS 的 LOQ 分別為 100 ng/mL 和 10 ng/mL。圖 1 顯示了各分析物在LOQ 下的提取離子流圖。圖 2 顯示了兩種化合物的校正曲線。

重復進樣校正濃度范圍內的質控樣品時，該方法呈現(xiàn)出*的精密度。EtG 的 %RSD 小于 9.8％，EtS 的 %RSD小于 4.0％。此外，17 個不同批次的正常受試尿液中未觀察到明顯的基質效應。圖 3 顯示了與校正樣品相比，不同批次尿液的內標峰面積回收率。

結論：

• TSQ Quantis 三重四極桿質譜儀為尿液中 EtG 和 EtS的分析提供了的靈敏度和耐用性。
• 采用該方法分析尿液中的 EtG 和 EtS 時，定量限分別為 100 ng/mL 和 10 ng/mL。
• 該方法適用于法醫(yī)毒物學分析

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